波多野结中文版在线看,国产露脸无码A区久久,精品国产乱码久久久久久郑州公司,久久久中文久久久无码

產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞成團(tuán)和細(xì)胞出芽實驗

細(xì)胞成團(tuán)和細(xì)胞出芽實驗

更新時間:2016-05-12   更新時間:2016-05-12   點擊次數(shù):4589次

導(dǎo)言

近幾年來,3Dthree dimensional)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)開始成為生物學(xué)研究新的研究方法。使用3D系統(tǒng)培養(yǎng)系統(tǒng)能更好的模擬生物體內(nèi)的真實生理環(huán)境,而2D(傳統(tǒng)的貼壁培養(yǎng))細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)不能有效的模擬細(xì)胞在生物體內(nèi)的生理環(huán)境。3D細(xì)胞技術(shù)有很多種方法,使用多細(xì)胞形成的細(xì)胞團(tuán)是其中主要的研究應(yīng)用之一。細(xì)胞團(tuán)是微小的細(xì)胞聚集簇,可以用來研究3D情況下向外生長的情況(細(xì)胞出芽)。

 

一.實驗原理

目前有幾種方法可以用來生成細(xì)胞團(tuán)。 所有方法的原理都是防止細(xì)胞貼壁,并且創(chuàng)造環(huán)境增強臨近細(xì)胞間的細(xì)胞外基質(zhì)的粘附。這里我們提供的是一個液體膠的形式來形成細(xì)胞團(tuán)。這是一種形成細(xì)胞團(tuán)的非常簡單的方法,有如下的優(yōu)勢

1)可以形成單個細(xì)胞團(tuán),并且易于用顯微鏡觀測;

2)易于換液,可以進(jìn)行長時間的培養(yǎng);

3)這個方法操作簡單,不需要額外的設(shè)備就能完成。

簡單來講就是先在多孔板底部加入瓊脂糖,之后再加入細(xì)胞懸液。加入瓊脂糖不僅僅是提供了個疏水表面,細(xì)胞不會粘附,又提供了一個凹液面,細(xì)胞可以聚集在凹孔中,加大了細(xì)胞和細(xì)胞之間接觸的幾率,增強了細(xì)胞之間的粘附。

 

二.實驗材料

 

96孔板,平底(Corning 3370

血管生成載玻片(德國ibidi,81506)

1.5%瓊脂糖(SigmaA9539,使用PBS或者超純水配置)

胰酶

Matrigel

細(xì)胞培養(yǎng)基

 

三.成團(tuán)實驗步驟

 

196孔板預(yù)處理

  • 配置1.5%瓊脂糖,保持配好的瓊脂糖為液體狀態(tài)
  • 96孔板每孔添加50μl配置好的1.5%瓊脂糖,室溫靜置20分鐘,待瓊脂糖冷卻固化。50μl瓊脂糖能剛好覆蓋96孔板單孔的底部,并且形成凹液面。
  • 96孔板的孔間加入無菌PBS,保證實驗的濕度

 

2.細(xì)胞成團(tuán)

  • 按照日常方法準(zhǔn)備細(xì)胞懸液
  • 根據(jù)試驗設(shè)計確定單孔需加入的細(xì)胞個數(shù),本例中,每孔加入500個細(xì)胞
  • 加入50-100μl的稀釋好的細(xì)胞懸液,保證每孔總液體體積(包括瓊脂糖)不超過200μl,每孔細(xì)胞數(shù)500
  • 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
  • 每天都要換液,注意在細(xì)胞成團(tuán)過程中不能劇烈晃動培養(yǎng)板
  • 可以用相差顯微鏡觀察細(xì)胞成團(tuán)情況(圖一)。

?

                  圖一:不同細(xì)胞系的成團(tuán)過程(每孔500個細(xì)胞),比例尺 200μm

 

四.出芽實驗及分析

 

實驗步驟:

 

  1. 準(zhǔn)備基質(zhì)膠
  • 實驗前一天將Matrigel置于冰盒中,放入4。C冰箱,使膠能過第二天緩慢融化。(注意:同樣要準(zhǔn)備一些4。C預(yù)冷的槍頭用于吸取Matrigel
  • 開始實驗前,將Matrigel始終保持放在冰盒中。
  • 打開滅菌包裝,取出ibidi血光生成載玻片 µ-Slide Angiogenesis
  • 每孔中加入10μl Matrigel。注意槍頭要垂直于內(nèi)孔的正上方加入Matrigel,防止有Matrigel流經(jīng)上孔而留下殘留膠。

 

2.凝膠 

  • 蓋上ibidi血管生成載玻片的蓋子。
  • 準(zhǔn)備一個10cm的培養(yǎng)皿,放入浸過水的紙巾,制成一個濕盒。
  • ibidi血管生成載玻片放入培養(yǎng)皿中,蓋上培養(yǎng)皿蓋。
  • 將整個培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中,靜置30分鐘左右,等待膠凝結(jié)。

?

 

3.細(xì)胞出芽實驗及圖像分析

  • 將形成的細(xì)胞團(tuán)吸出,置于凝固的膠平面上
  • 培養(yǎng)并使用顯微鏡采集出芽圖像
  • 采用圖像分析軟件采集細(xì)胞團(tuán)面積,出芽覆蓋面積,出芽個數(shù)以及總出芽長度等數(shù)據(jù)。

聯(lián)


厨房的春潮A片| 顶级欧美色妇XXXXX| 午夜精品一区二区三区在线视| 岳今晚让我玩个够肥水一体探岳体 | 欧美XXXX黑人又粗又长| 成人DVD碟片| 丰满少妇女裸体BBW| 特黄把女人弄爽又大又粗| 99好久被狂躁A片视频无码 | 无码 制服 丝袜 国产 另类| 丰满少妇高潮惨叫正在播| 午夜福利影院| 亚洲国产精品一区二区第四页| 国产精品久久久久久亚洲AV| 综合AV人妻一区二区三区| 国产精品99久久久久久人| 美女露100%双奶头无遮挡免费| 亚洲综合AV一区二区三区 | 自拍偷自拍亚洲精品播放| 亚欧洲乱码视频一二三区| 啊灬啊灬啊灬快灬A片免费| 我的性奴的肉玩具1一17心奴| 日本成AⅤ人片日本伦| 久久久久久久久久| 久久国产精品亚洲婷婷A片| 天天摸日日添狠狠添婷婷 | 啪啪时戴套了还流出了液体| 老熟妇高潮一区二区三区| 美女洗澡把胸和屁股扒开给别人看| 少妇厨房愉情理9仑片视频| 公咬着小娇乳H边走边欢视频| 偷看18美女洗澡过程| 精品人人妻人人澡人人爽人人| 免费看又黄又无码的网站| 性开放的交换艳妇俱乐部小说| 国产V综合V亚洲欧美久久| 无码色偷偷亚洲国内自拍| 无码中文日本精品一区| 粗大猛烈进出高潮视频大全| 扒开粉嫩小泬白浆20P| 免费看美女私人部位的直播|