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ibidi流體剪切力實(shí)驗(yàn)|通道載玻片串連方法步驟

更新時(shí)間:2022-08-09   更新時(shí)間:2022-08-09   點(diǎn)擊次數(shù):1176次

  ibidi流體剪切力實(shí)驗(yàn)應(yīng)用逐步說(shuō)明了如何串聯(lián)連接多個(gè)Luer-Slides。優(yōu)點(diǎn)是僅使用一個(gè)流體單元即可觀察和培養(yǎng)多個(gè)載玻片。當(dāng)使用相同規(guī)格的載玻片時(shí),載玻片中的流速是相同的。也可以通過(guò)連接不同高度的載玻片來(lái)改變剪切速率。

  

  本次介紹了兩個(gè)載玻片連接的過(guò)程。但是它可以應(yīng)用于大量的載玻片。


  將一個(gè)塑料連接器插入通道載玻片的兩端(6厘米),以在載玻片之間連接起來(lái)。下圖是在兩端帶有兩個(gè)配套的Luer公接頭的連接器管。可用乙醇或高壓滅菌消毒接頭。

   

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  *必須在無(wú)菌條件下執(zhí)行以下步驟!

  

  3. 播種細(xì)胞  

  · 準(zhǔn)備1.67 · 106 cells/ml.的細(xì)胞懸液?! ?/p>

  · 將150 µl注入通道。僅填充通道體積(圖1a)。  

  · 將帽蓋在Luer接頭上,并將載玻片放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)半小時(shí)來(lái)固定細(xì)胞?! ?/p>

  · 細(xì)胞固定后,將兩邊儲(chǔ)液接口各加60 µl充滿。

  

  4. 連接載玻片  

  現(xiàn)在準(zhǔn)備載玻片,使細(xì)胞在通道中生長(zhǎng),并向儲(chǔ)液池中填充60 µl無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基(請(qǐng)參見(jiàn)第3節(jié))?! ?/p>

  · 在連接之前,將所有儲(chǔ)液器各加60 µl(圖1b)。  

  · 將連接器管的一個(gè)Luer適配器插入載玻片的一個(gè)母Luer適配器中(圖1c)。  

  · 將一些預(yù)備的培養(yǎng)基吸入注射器。倒轉(zhuǎn)注射器并將多余的空氣推出(圖1d)?! ?/p>

  · 使用沒(méi)有氣泡的注射器在載玻片端口注入??赡軙?huì)有些溢出(圖1e)。  

  小心地將液體注入載玻片,直到連接器管中充滿為止(圖1f)

  

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  圖1:(a)接種細(xì)胞時(shí)的用量; (b)載玻片在連接之前已*填滿; (c)載玻片中插入連接管; (d)無(wú)氣泡的注射器; (e)將注射器插入載玻片一端; (f)用注射器推動(dòng)介質(zhì)來(lái)填充連接器管道 

  · 當(dāng)連接器管道*充滿時(shí)(圖2a),將其插入第二張載玻片的接口上(圖2b-d)。  

  · 如果要連接兩個(gè)以上的載玻片,將第二個(gè)連接器管放在第二個(gè)載玻片空的另一端口上,用注射器推入介質(zhì),依此類推?! ?/p>

  · 慢慢連接的所有載玻片將注射器從適配器上卸下(圖2e)?! ?/p>

  · 要將載玻片連接到灌注套件,兩個(gè)Luer容器必須在頂部填充培養(yǎng)基??捎眉埥聿寥ミ^(guò)多的培養(yǎng)基?!?/p>

  

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  圖2:(a)連接管已*充滿; (b-c)將連接器管插入第二載玻片的魯爾接頭上; (d)帶有適配接頭管連接; (e)取下注射器; (f)擦去溢出的介質(zhì),并填充儲(chǔ)液罐以連接到灌注套件。

  

  5. 連接到灌注裝置  

  將載玻片連接到灌注套件

  

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  圖片串聯(lián)安裝帶有兩個(gè)µ-Slides I Luer的一個(gè)流體單元。

聯(lián)


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