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提取動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA

更新時(shí)間:2016-09-19   更新時(shí)間:2016-09-19   點(diǎn)擊次數(shù):2453次

提取動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA

 

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

       研磨破碎軟骨組織(大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨),提取其總RNA。

 

實(shí)驗(yàn)原理

       充分磨碎軟骨樣品(大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨),再用相關(guān)試劑提取其總RNA。

 

實(shí)驗(yàn)材料和器具

樣品:大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨

儀器:多樣品組織研磨儀(上海凈信,Tissuelyser-24)

耗材:研磨罐(上海凈信,***ml),研磨珠(上海凈信,***mm,***顆)

試劑:液氮若干

 

實(shí)驗(yàn)步驟

1.研磨軟骨組織

1.1 取適量大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織,剪切成約***立方厘米小塊;

1.2 將小塊軟骨組織置于液氮***分鐘或放入***度冰箱冷凍30分鐘;

1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐,蓋好蓋子;

1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管,放入已經(jīng)在***度冰箱預(yù)冷好的適配器中,加入變性液,β-巰基乙醇;

1.5 將適配器放入凈信研磨儀中,在***hz條件下,研磨***min,可得到勻漿狀的軟骨組織;

2.總RNA提取

2.1 冰水浴下,加酸性水飽和酚,搖勻,加醋酸鈉,異戊醇混合液,冰水浴上***min;

2.2 ***℃下,離心,取上清液,加異戊醇混合液,離心取上清,加異丙醇,***℃下沉淀,離心,得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀,加無(wú)RNA酶水,溶解得膠狀溶液;

2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀,取沉淀,乙醇洗滌后用無(wú)RNA酶水溶解沉淀,即得關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA溶液。

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

       采用本實(shí)驗(yàn)方法提取的動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA的收率高,并且純度高、質(zhì)量、完整性好,可以滿足分子生物學(xué)研究應(yīng)用。

                     總RNA甲醛變性膠電泳結(jié)果

          Ⅱ型膠原PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

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